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血清剥夺抑制心肌细胞增殖、促进凋亡及对P53和Wnt/β-catenin信号通路的影响

【作者】周思维 王宇 左权 赵峰 王鹏贺 张莎 朱霓 赵仙先 吴弘

【关键词】 心肌缺血; 心肌细胞; 血清剥夺; 细胞凋亡; Wnt β-catenin信号通路;

摘要目的研究血清剥夺对心肌细胞增殖和凋亡的影响及其机制。方法将人心肌细胞AC16分为血清剥夺组(细胞在无胎牛血清的DMEM培养液中培养48 h)、对照组(细胞在含10%胎牛血清的DMEM培养液中培养48 h)。采用CCK-8法检测心肌细胞活力,EdU实验法检测细胞DNA合成水平,流式细胞术检测细胞凋亡水平及线粒体膜电位变化,蛋白质印迹分析检测心肌细胞中caspase-9、Bcl-2、P53、增殖细胞核抗原(PCNA)、cyclinD1、β-连环蛋白(β-catenin)、Wnt5a、Axis抑制蛋白1(Axin1)、蓬乱蛋白2(Dvl2)、蓬乱蛋白3(Dvl3)、低密度脂蛋白受体相关蛋白6(LRP6)的表达水平。结果 CCK-8实验结果显示对照组的光密度值为1.93±0.01,血清剥夺组的光密度值为1.08±0.08,后者为前者的55.8%,两组比较差异有统计学意义(P<0.01);细胞DNA合成受到抑制,血清剥夺组细胞DNA合成水平下降为对照组的65.6%,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。血清剥夺诱导了心肌细胞的凋亡,对照组凋亡率为(6.34±0.47)%,血清剥夺组凋亡率为(56.83±1.90)%,后者为前者的8.9倍,两组比较差异有统计学意义(P<0.01);血清剥夺组心肌细胞线粒体膜电位下降,但与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。蛋白质印迹分析结果显示,血清剥夺促进了心肌细胞中caspase-9蛋白的表达,同时抑制了心肌细胞中Bcl-2、P53、PCNA、cyclin D1蛋白的表达;血清剥夺抑制了心肌细胞中β-catenin、Wnt5a、Axin1、Dvl2、Dvl3、LRP6蛋白的表达。结论血清剥夺可抑制心肌细胞增殖并促进细胞凋亡,其机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路有关。

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        出版单位:《第二军医大学学报》编辑部
        单位地址:上海市杨浦区翔殷路800号第二军医大学学报编辑部
        邮编:200433